Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment

高性能、快速、可靠的人类全外显子组测序解决方案,包括全面、最新的外显子组富集panel。

6.5小时

分析时间

约2小时

手动操作时间

50-1,000 ng高质量基因组DNA(如果直接使用血液和唾液样本,请参阅参考指南)

起始量

详情请参见规格表

概述

Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment提供了一种经济高效、可靠的解决方案,用于人类全外显子组测序(WES)。本试剂盒提供:

  • 集中、全面覆盖——使用集中、全面的最新panel,获得更多测序结果并全面覆盖外显子组

  • 卓越的富集性能——通过多重分析降低成本并提高样本通量,同时实现高目标覆盖率和覆盖均一性

  • 快速、简化的工作流程——从DNA到文库制备、富集和富集后扩增仅需6.5小时,采用快速、用户友好的工作流程,包括内置文库产量均一化功能和简化的杂交方案

  • 可选的线粒体基因组富集——使用加标panel轻松扩展线粒体基因组覆盖范围

  • 支持自动化的工作流程——通过我们的合作伙伴查找适用于各种自动化平台的方法

单一供应商提供的简化工作流程解决方案

该全外显子组测序试剂盒包括文库制备和杂交试剂、纯化/片段选择磁珠和标签。该试剂盒还包括Twist Bioscience for Illumina Exome 2.5 Panel,该panel为公共数据库中报告的变异提供了更高的目标区域覆盖度。


规格


需要的产品

Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment试剂盒包括文库制备、富集、富集探针panel、纯化磁珠和标签接头试剂。如果愿意,请选择不同的标签集。 

Twist Bioscience for Illumina Mitochondrial Panel是可选的固定内容插入panel,可对线粒体DNA变异进行富集和测序。  

对于直接血液输入,需要使用Flex Lysis Reagent Kit。

Infinium MIDI Heatblock Insert适用于SciGene HybEx Microheating系统,是富集步骤所必需的。 

/ 结果

应用

Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment是一款快速、全面的端到端全外显子组测序解决方案,支持从样本到报告的全程分析。

工作流程示例

1
制备

Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment

3
分析

项目建议

仪器 Recommended number of samples Read length
NextSeq 2000 System

Samples per run (by flow cell type): P2: 19, P3: 57 (based on 50× mean target coverage, 42M reads, 4.2 Gb of data)

2 × 101 bp

NovaSeq 6000 System

Samples per run by flow cell type: SP: 34, S1: 69, S2: 176, S4: 428 based on 50× mean target coverage, 42M reads, 4.2 Gb of data. Note: S4: 428 requires NovaSeq Xp workflow or additional indexes.

2 × 101 bp


相关应用和方法

比较

Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment Illumina DNA Prep with Enrichment
分析时间 6.5小时 约6.5小时
自动化详情 探索可用的自动化方法 探索可用的自动化方法
内容说明 37.5 Mb编码内容(≥99%的RefSeq、CCDS、ClinVar和ACMG致病/可能致病变异,COSMIC癌症基因普查内容),OMIM 外显子组:45 Mb外显子内容(≥ 98%的RefSeq、CCDS和Ensembl编码内容)。
定制:0.5-15 Mb目标基因组内容。
固定基因集panel:内容因panel而异。
说明 一种快速、易于使用的文库制备方法,具有富集工作流程,采用具有最新外显子组内容的聚焦富集探针panel,可实现经济高效、可靠的人类全外显子组测序。 在约6.5小时内,从低DNA起始量和各种样本类型中制备用于各种实验的测序文库,包括全外显子组、定制和固定panel靶向测序。 
手动操作时间 约2小时 约2小时, 约2小时
起始量 50-1,000 ng高质量基因组DNA(如果直接使用血液和唾液样本,请参阅参考指南) 10 -1000 ng高质量基因组DNA或50-1000 ng FFPE DNA。(对于血液和唾液样本,请参阅参考指南)。
系统 NextSeq 550 Desktop Sequencer, NextSeq 2000 System, NextSeq 1000 System, NextSeq 550Dx in Research Mode, NovaSeq X System, NovaSeq 6000 System, NovaSeq X Plus System MiSeq Desktop Sequencer, iSeq 100 System, NextSeq 550 Desktop Sequencer, NextSeq 2000 System, MiSeqDx in Research Mode, MiniSeq System, NextSeq 550Dx in Research Mode, NovaSeq X System, NovaSeq 6000Dx in Research Mode, NovaSeq 6000 System, NovaSeq X Plus System
作用机制 磁珠固化转座酶和杂交捕获化学技术 磁珠固化转座酶和杂交捕获化学技术
方法 Targeted DNA sequencing, Exome sequencing, Target enrichment Custom sequencing, Targeted DNA sequencing, Exome sequencing, Target enrichment
多重分析 对多达12重预富集文库混合池进行测试。试剂盒配置支持多达192个样本的多重分析。最多支持384个样本。 多达384个可用的唯一双标签。对多达12重预富集文库混合池进行测试。
核酸类型 DNA DNA
在靶read 根据内部检测的平均性能,约为90% 外显子组panel≥85%(来自示例数据集的结果;实际性能可能有所不同)
特殊的样本类型 Blood, Saliva Blood, Low-input samples, FFPE tissue, Saliva
物种 Other, 人
技术 Illumina测序 Illumina测序
均一性 基于内部测试的平均性能,均一性为≥91%(5 Gb、20x下的覆盖度%) ≥90%(4 Gb、20x下的覆盖度%;对于外显子组panel)
变异类别 Single nucleotide polymorphisms (SNPs), Loss of heterozygosity (LOH), Somatic variants, Germline variants, Insertions-deletions (indels), Copy number variants (CNVs) Single nucleotide polymorphisms (SNPs), Loss of heterozygosity (LOH), Somatic variants, Germline variants, Insertions-deletions (indels), Copy number variants (CNVs)

选择工具:

Exome 2.5 Panel性能提升

使用Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment和随附的1.5小时或16小时杂交时间的Exome 2.5 Panel或1.5小时杂交时间的Illumina Exome Panel(IEP,20020183)构建文库并进行富集。在NovaSeq 6000系统上对富集文库进行测序,并使用DRAGEN Enrichment App进行分析。

在计算机环境中实现高数据库目标覆盖率

将Exome 2.5 Panel和Exome Panel的平台文件与列出的公共数据库进行比较,确定并报告重叠百分比。

在公共数据库中出色地覆盖疾病相关变异

Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment使用1.5小时(橙色)或16小时(蓝色)的杂交时间,在公共数据库中≥20×的靶标上显示出较高的平均覆盖度百分比。

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Flex Lysis Reagent Kit (96 reactions)

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包含使用Illumina DNA Prep和Illumina DNA Prep with Enrichment处理血液样本的试剂。单独购买文库制备、富集、富集探针panel和标签接头试剂。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set A, Tagmentation (96 Indexes, 96 Samples)

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set A, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set B, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set C, Tagmentation (96 Indexes, 96 Samples)

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set C, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set D, Tagmentation (96 Indexes, 96 Samples)

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set D, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Infinium MIDI Heatblock Insert

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Nextera Flex for Enrichment杂交步骤所需的SciGene Hybex微型加热系统的加热插块。

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Illumina Purification Bead, 100mL

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包含一个100 mL微珠容器,用于文库纯化和大小选择。单独购买文库制备和富集试剂、探针panel和标签。

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Illumina Purification Bead, 400mL

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包含四个100 mL微珠容器,用于文库纯化和大小选择。单独购买文库制备和富集试剂、探针panel和标签。

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常见问题解答

是的,可以使用10-49 ng的gDNA起始量。但是,本实验方案不对最终的预富集文库产量进行均一化<50 ng,因此需要在富集前后对文库进行定量和均一化。

本方案已通过EDTA采集管中采集的新鲜血液进行了验证。可以使用其他抗凝剂,但使用此试剂盒时无法保证。

本实验方案已使用唾液(仅针对使用Oragene DNA唾液采集管采集的唾液)进行了验证。

Twist Bioscience for Illumina Mitochondrial Panel是可选的固定内容panel,用于覆盖线粒体基因组(chrM)的16,659个碱基对(bp)和37个基因,并允许线粒体DNA(mtDNA)变异的富集和测序。将此panel用作Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment实验方案中的插入panel,并将ChrM的覆盖度添加到您的实验中。

以前称为Illumina DNA Prep with Exome 2.0 Plus Enrichment的产品现在称为Illumina DNA Prep with Exome 2.5 Enrichment(货 号20077595和20077596)。外显子组panel寡核苷酸没有变化,但包含的标签已更新为 Illumina DNA/RNA UD Indexes。

/ 结果

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