众所知周,接头连接技术可实现高覆盖度均一性和可靠的文库制备,获得精确的链信息,即使采用降解的样本,效果依然出众。
我们一直在改进该技术。我们在这种通用甲基化接头设计的基础上,在最初的连接步骤中添加了标签序列。纯化、样本转移和移液的步骤更少。提高了工作流程的效率,实现了更稳健的多重测序。
连接技术可为测序构建NGS文库。这个过程会使用酶来连接DNA片段两端的特定接头。然后在每条链的平末端添加一个A碱基,将其用于连接测序接头。每个接头都含有T碱基突出,提供了互补的突出末端,以便和带A尾的片段化DNA相连。
Illumina接头连接是研究人员首选的技术,自2011年以来,已有9,926份文献引用了该技术。接头连接包含完全互补的测序引物杂交位点,能生成单端、双端和带标签的read。无需额外的PCR步骤来添加标签和标签引物位点。无凝胶操作流程消除了其他方法中耗时的凝胶纯化步骤,从而使这个过程更加一致,并且实现了完全自动化。
连接技术让高通量实验中的RNA测序变得更加经济实惠,也让研究人员能以比芯片更低的成本在基因表达图谱研究中使用NGS。该技术还为大规模的全基因组重测序、靶向重测序、从头测序、宏基因组学和甲基化研究提供了一种经济高效的DNA测序解决方案。
这种基于快速连接的一体化文库制备方法支持低样本起始量和多种RNA-Seq应用。接头连接技术是RNA-Seq、基因组测序或外显子组富集等应用的理想选择。
TruSeq采用了接头连接、片段化、末端修复,能有效进行Poly(A)捕获。但它需要单独进行DNA剪切。该技术可捕获编码转录组,是全转录组RNA-Seq、外显子组富集、大规模全基因组重测序、靶向重测序、从头测序、宏基因组学和甲基化研究的理想选择。
Nextera采用连接磁珠的转座酶技术。该方案整合了DNA提取、自动化的片段化、文库制备和文库归一化,非常适合用于全基因组测序及靶向富集应用。
我们的合作伙伴已经开发了高通量和低通量的自动化方法,可用于我们的文库制备产品系列。
使用唯一双标签接头增加每次运行的样本数量,并优化高通量测序。
唯一分子标记(UMI)有助于进行错误校正,能确保准确性。可在减少假阳性变异检出的同时,提高变异检测的灵敏度。