NGS工作流程步骤

文库制备对于成功进行NGS工作流程至关重要。该步骤会制备出兼容测序仪的DNA或RNA样本。通常会先对DNA进行片段化处理，然后再向两端添加特定的接头来构建测序文库。在Illumina测序工作流程中，接头含有的互补序列可以使DNA片段结合到流动槽上。随后再扩增和纯化片段。

为了节省资源，可以将多个文库混合在一起，在同一运行中进行测序——该过程称为多重分析。接头连接过程中，唯一标签序列（或说“条形码”）会添加到每个文库。这些条形码可以在数据分析过程中区分文库。

文库制备资源

NGS工作流程的测序步骤需要将文库上样到流动槽然后置于测序仪中。簇生成过程会扩增DNA片段簇，生成数百万个单链DNA拷贝。大多数Illumina测序仪器可以自动生成簇。

在边合成边测序（SBS）过程中，化学修饰的核苷酸会通过天然的互补性与DNA模板链结合。每个核苷酸都有一个荧光标记和一个可逆终止子，后者可以阻止下一个碱基的掺入。荧光信号可以指示出加入的核苷酸种类，终止子被切割后，下一个碱基才可以继续结合。

读取正向DNA链后，read会被洗掉，随后重复该过程，读取反向链。这种方法称为双端测序。

如今，您可以使用直观的数据分析应用程序来分析NGS数据，无需进行生物信息学培训或另外雇佣实验室人员。这些工具可以进行序列比对、变异检出、数据可视化或解读。