利用单碱基延伸以及核苷酸的竞争性添加,SBS原理带来了高度准确的测序。SBS能够提供最高比例的优质数据,质量分值高于Q30(质量分值,表示碱基识别出错的概率为0.1%)。由于假阳性、假阴性和错误检出比例低于其他所有NGS平台,这一优势显著提升了项目效率。3
优化的SBS试剂可确保全基因组范围内的均匀覆盖和准确性,重复或GC丰富的区域等通常难以测序的区域也不例外。SBS采用基于可逆终止子的逐个碱基测序化学,消除了离子半导体或焦磷酸测序技术中出现的均聚物问题。SBS技术还避免了杂交和连接测序化学中出现的GC偏离量过高的问题3。
SBS可用于双端测序——测序文库来自DNA片段的两端,这样可生成高质量测序数据。由于每对read之间的距离已知,因此双端测序能够改善比对和基因组装。以read对的形式进行序列比对实现了结构变异、基因融合以及转录本亚型的准确检出。
针对SBS试剂、光学元件和流动槽的进一步创新全面提升了Illumina测序仪的性能。下面列举了一些最新的进展。